外泌體指標鑒定實驗

簡要描述：外泌體指標鑒定實驗：外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡（30-150nm），現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。

更新時間：2022-12-23
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實驗

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詳細介紹

一、實驗原理

所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。

外泌體（Exosome）主要檢測指標為CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等，針對外泌體的定性檢測，至少選擇2-3個指標就能滿足文章發(fā)表就可以。大部分文獻中沒有檢測內(nèi)參，個別文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作為內(nèi)參進行檢測，外泌體中的Actin、GAPDH和Tubulin的表達豐度相對于正常細胞樣品中的較低，可能會檢測不到任何條帶或者條帶微弱。

二、實驗流程

1. 外泌體BCA法定量。

2. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳（SDS-PAGE）。

3. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜。

4. 膜的封閉和抗體孵育。

5. 結(jié)果檢測。

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