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穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實驗:穩(wěn)定表達細胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株)指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上,使細胞長期穩(wěn)定表達該基因。
分子克隆與質(zhì)粒載體構建:分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA的片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體,形成重組克隆載體,通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導的方式,引入適合的寄主體內(nèi)得到復制與擴增,然后再從篩選的寄主細胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體,可以得到插入DNA的許多拷貝,從而獲得目的基因的擴增。
普通電泳PCR擴增實驗是體外酶促合成特異DNA的片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
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